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科研体系

细胞转染

细胞转染概述

细胞转染是将外源核酸(DNA、RNA、siRNA等)导入真核细胞内,使其在细胞中表达或发挥调控作用的分子生物学技术,是基因功能研究、蛋白制备、基因编辑等实验的核心基础技术。

目的

1. 基因功能研究,实现过表达或沉默特定基因,研究基因功能与细胞表型变化
2. 蛋白生产,在真核细胞中表达重组蛋白
3. 基因编辑,递送CRISPR/Cas9系统组分,实现基因敲除或敲入
4. 构建稳定细胞株,规模化表达重组蛋白、抗体
5. 病毒包装,将病毒载体质粒转入细胞(如293T细胞),包装慢病毒、腺病毒等

分类

按表达时长划分,分为瞬时转染和稳定转染,瞬时转染表达周期短,操作快,外源核酸不整合到宿主基因组中。稳定转染操作周期长,但外源核酸可整合至宿主基因组中,可长期稳定表达。
按应用分,有质粒转染、siRNA转染、CRISPR组分转染等。

方法

(一)化学转染
1. 脂质体转染:操作简便、细胞毒性低,适配多数贴壁细胞,实验室常规首选
2. PEI阳离子聚合物转染:成本低、适配悬浮细胞,适合高通量蛋白表达
3. 磷酸钙共沉淀法:成本低廉,重复性较差,仅适用于293T等易转染细胞
(二)物理转染
1. 电穿孔法:借助瞬时电场击穿细胞膜,适配原代细胞、干细胞等难转染细胞,细胞死亡率相对较高
2. 显微注射法:直接将核酸注入胞核,效率高,仅适用于少量单细胞操作
3. 基因枪法:多用于植物、厚壁微生物,动物细胞应用较少
(三)病毒介导转染
1. 慢病毒:可感染分裂/非分裂细胞,易整合基因组,适合构建稳定细胞株
2. 腺病毒:不整合基因组,瞬时高表达,适合体内短期实验
3. AAV病毒:免疫原性低,体内表达周期长,是基因治疗主流载体

技术特点

我公司目前已建立了完善脂质体转染以及PEI转染方法,可通过转染实现细胞特定基因过表达或沉默,研究基因特性;瞬时大量表达目标蛋白用于蛋白相关分析;构建慢病毒用于构建稳转细胞系;构建杆状病毒用感染昆虫细胞表达蛋白;构建腺病毒,AAV病毒用于蛋白表达、疫苗研发等。

  • 咨询电话:+86 029-87014200

  • 邮箱:sxkyn@foxmail.com

  • 陕西省杨凌示范区渭惠路东段农科大厦2号楼10层21022室

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